Plasmide Double Nickase (h) GPD2: sc-402698-NIC

GPD2 code la glycérol‑3‑phosphate déshydrogénase mitochondriale, un composant flavoprotéique clé de la navette du glycérophosphate, qui transfère les équivalents réducteurs cytosoliques vers les mitochondries en couplant l’oxydation du glycérol‑3‑phosphate à la réduction de l’ubiquinone. Cette activité relie la glycolyse à la phosphorylation oxydative, influence l’équilibre rédox cellulaire et soutient le métabolisme des lipides et des glycérolipides via le contrôle des réserves de glycérol‑3‑phosphate. En modulant le transport d’électrons mitochondrial et la production d’espèces réactives de l’oxygène, GPD2 contribue à la flexibilité métabolique en conditions de stress nutritif et dans des contextes associés à l’hypoxie. Un dérèglement de la fonction de GPD2 a été étudié en lien avec des phénotypes de maladies métaboliques et des états bioénergétiques altérés observés dans divers modèles de recherche en cancérologie et en endocrinologie.

GPD2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPD2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPD2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPD2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPD2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.