Plasmide CRISPR d'Activation (h) GP-39: sc-402147-ACT

CHI3L1 code pour la glycoprotéine GP-39 (YKL-40), une protéine sécrétée de type chitinase-like dépourvue d’activité chitinase enzymatique, mais qui module le remodelage de la matrice extracellulaire, l’adhésion cellulaire et la signalisation inflammatoire. GP-39 est produite par les macrophages, les neutrophiles, les fibroblastes, ainsi que par de multiples compartiments stromaux et épithéliaux, et elle influence la chimiotaxie, les programmes angiogéniques et les réponses de réparation tissulaire. Elle est couramment étudiée dans des voies liées à l’activation de l’immunité innée, aux réseaux de cytokines et au remodelage fibrotique, notamment les réponses transcriptionnelles associées à MAPK/ERK, PI3K/AKT et NF-κB. Une expression altérée de CHI3L1/GP-39 est associée à l’inflammation chronique, à la fibrose et à la biologie du microenvironnement tumoral, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du dialogue immuno–stroma et de la dynamique de la matrice extracellulaire.

GP-39 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CHI3L1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GP-39 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CHI3L1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CHI3L1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GP-39. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CHI3L1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GP-39 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GP-39 dans les cellules tumorales présentant une expression de CHI3L1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.