Plasmide Double Nickase (h) golgin 97: sc-403152-NIC

GOLGA1 code la golgine 97, une golgine à domaines en hélice enroulée (coiled-coil) localisée au réseau trans-golgien (TGN) et agissant comme facteur d’attache des vésicules afin de coordonner le transport rétrograde des endosomes vers le Golgi ainsi que l’organisation des membranes du Golgi. Grâce à ses interactions avec de petites GTPases et des facteurs d’arrimage, la golgine 97 contribue au maintien de la fidélité du tri, au recyclage des cargaisons et à un trafic polarisé soutenant la sécrétion et l’homéostasie des protéines membranaires. La perturbation de l’arrimage au Golgi et du transport rétrograde est largement associée aux réponses au stress cellulaire, à des altérations de la signalisation des récepteurs et à des défauts de maturation/traitement des protéines. En tant que composant du réseau de trafic endomembranaire, la golgine 97 est fréquemment étudiée dans des travaux portant sur l’intégrité du Golgi, la dynamique des organites et des phénotypes dépendants du trafic, pertinents pour la neurodégénérescence, la biologie des infections et la biologie des cellules cancéreuses.

golgin 97 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GOLGA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GOLGA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GOLGA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GOLGA1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.