Plasmide Double Nickase (h) golgin 245: sc-404412-NIC

GOLGA4 code la golgine 245, une protéine de la matrice du Golgi riche en domaines en hélice enroulée (coiled-coil), qui contribue à l’organisation du ruban golgien et à l’amarrage des vésicules, indispensables à un tri efficace des cargos le long de la voie de sécrétion. La golgine 245 participe à des processus de trafic membranaire coordonnant les transports rétrograde et antérograde entre le Golgi et les compartiments endosomaux, favorisant la bonne distribution des enzymes de glycosylation et le maintien de l’architecture du Golgi. La perturbation des réseaux d’amarrage et de trafic du Golgi est associée à des altérations de la polarité cellulaire, à l’activation de voies de signalisation de stress et à des défauts de maturation des protéines, fréquemment observés dans des contextes de cancer et de maladies neurodégénératives. En tant que marqueur et régulateur de la dynamique du Golgi, la golgine 245 est largement utilisée pour étudier l’organisation de l’organite, le transport vésiculaire et les voies liées à la protéostasie dans les cellules humaines.

golgin 245 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GOLGA4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GOLGA4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GOLGA4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GOLGA4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.