Plasmide Double Nickase (h) GnT-V: sc-403921-NIC

MGAT5 code la N-acétylglucosaminyltransférase V (GnT‑V), une enzyme résidente de l’appareil de Golgi qui catalyse l’ajout de ramifications β1,6‑GlcNAc sur les N‑glycanes, augmentant la complexité des glycannes et influençant le repliement, la stabilité et le trafic des protéines. En remodelant la N‑glycosylation, GnT‑V module l’abondance et l’intensité de signalisation des récepteurs de surface cellulaire et des molécules d’adhérence, affectant des voies liées à la réponse aux facteurs de croissance, aux interactions cellule–cellule et à la migration. Une activité altérée de MGAT5 a été associée à la dérégulation des réseaux de glycoprotéines observée dans de multiples contextes pathologiques, notamment des modifications de la signalisation cellulaire et du comportement métastatique associées au cancer. En tant que régulateur nodal du glycome cellulaire, MGAT5 est fréquemment étudié dans la régulation, dépendante de la glycosylation, de la fonction des récepteurs et des processus de reconnaissance liés à l’immunité.

GnT-V Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MGAT5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MGAT5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MGAT5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MGAT5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.