Plasmide Double Nickase (h) GnRH I: sc-401425-NIC

Le gène humain **GNRH1** code la gonadolibérine I (GnRH I), une neurohormone décapeptidique hypothalamique qui initie la signalisation endocrinienne de la reproduction en stimulant les gonadotropes hypophysaires à sécréter l’hormone lutéinisante (LH) et l’hormone folliculo‑stimulante (FSH). L’activité de la GnRH I intègre des signaux neuroendocriniens qui régissent le début de la puberté, la fertilité et la physiologie reproductive cyclique, en reliant la dynamique de sécrétion neuronale à la stéroïdogenèse en aval. Une dérégulation de l’expression de **GNRH1** ou de la signalisation de la voie de la GnRH est associée à des troubles de l’axe hypothalamo‑hypophyso‑gonadique, notamment l’hypogonadisme hypogonadotrope congénital et des anomalies du calendrier pubertaire, et fait fréquemment l’objet d’études en endocrinologie de la reproduction et en développement neuroendocrinien. Comme la signalisation de la GnRH influence des programmes transcriptionnels dans les tissus hypophysaires et gonadiques, **GNRH1** est également pertinent pour modéliser les rétrocontrôles endocriniens et les réseaux de gènes sensibles aux hormones.

GnRH I Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GNRH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GNRH1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GNRH1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GNRH1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.