Plasmide CRISPR/Cas9 KO GnRH I (h): sc-401425

Présentation

GNRH1 code la gonadolibérine I (GnRH I), un décapeptide hypothalamique qui initie une signalisation pulsatile vers les gonadotropes hypophysaires via le récepteur GnRHR, un RCPG, en activant les voies phospholipase C/IP3–DAG/Ca2+ ainsi que la voie MAPK. Cette signalisation régule la synthèse et la sécrétion de l’hormone lutéinisante (LH) et de l’hormone folliculo-stimulante (FSH), coordonnant le fonctionnement de l’axe reproducteur, le moment de la puberté et la fertilité. Des altérations de l’expression de GNRH1 ou de la maturation du peptide ont été impliquées dans des troubles de la régulation de l’axe hypothalamo-hypophyso-gonadique, notamment l’hypogonadisme hypogonadotrope congénital et des phénotypes endocriniens reproducteurs apparentés. Dans des modèles cellulaires et tissulaires, GNRH1 est étudié pour la différenciation neuroendocrine, la dynamique de sécrétion hormonale et le contrôle transcriptionnel des programmes de signalisation reproductifs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GnRH I (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GNRH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GNRH1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GNRH1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GnRH I.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GNRH1 pour l'étude de la signalisation de GnRH I, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GNRH1 essentiels à la fonction de GnRH I
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GNRH1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GnRH I plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GnRH I plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GNRH1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GnRH I plasmide HDR (h) et le GnRH I (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GNRH1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GNRH1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.