Plasmide CRISPR d'Activation (h) GnRH I: sc-401425-ACT

GNRH1 code l’hormone de libération des gonadotrophines I (GnRH I), un décapeptide hypothalamique qui initie la signalisation endocrine de la reproduction en stimulant les gonadotropes de l’hypophyse antérieure à sécréter l’hormone lutéinisante (LH) et l’hormone folliculo-stimulante (FSH). La GnRH I est produite à partir d’une préprohormone et maturée via des voies de sécrétion régulées ; sa libération pulsatile coordonne le fonctionnement de l’axe hypothalamo–hypophyso–gonadique, la maturation sexuelle et la fertilité. L’activation du récepteur de la GnRH engage une signalisation de la phospholipase C médiée par Gq/11, avec en aval la production d’IP3/DAG, la mobilisation du calcium et l’activation de voies de kinases protéiques qui contrôlent la transcription des gènes des gonadotrophines et la dynamique de leur sécrétion. Une signalisation de la GnRH I dérégulée est impliquée dans des troubles du timing pubertaire et des états hypogonadotropes, et elle est fréquemment étudiée en régulation neuroendocrinienne, en biologie de la reproduction et dans des modèles de maladies hormono-dépendantes.

GnRH I Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GNRH1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GnRH I Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GNRH1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GNRH1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GnRH I. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GNRH1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GnRH I au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GnRH I dans les cellules tumorales présentant une expression de GNRH1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.