GNPDA2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417433-ACT

A GNPDA2 humana (glucosamina-6-fosfato desaminase 2) codifica uma enzima citosólica que catalisa a conversão reversível de glucosamina-6-fosfato em frutose-6-fosfato e amônia, conectando a via biossintética das hexosaminas ao fluxo glicolítico central. Ao modular a disponibilidade de UDP-GlcNAc para a glicosilação de proteínas do tipo N e O, a GNPDA2 pode influenciar a detecção de nutrientes, a proteostase e processos de sinalização que dependem da regulação mediada por glicanos. Estudos genéticos e funcionais associaram a GNPDA2 a fenótipos metabólicos, incluindo índice de massa corporal e risco de obesidade, destacando sua relevância para vias que governam a homeostase energética e o metabolismo responsivo à insulina. Essas características tornam a GNPDA2 um alvo útil para investigar como a dinâmica da via das hexosaminas afeta o crescimento celular, respostas ao estresse e reprogramação metabólica em sistemas modelo humanos.

GNPDA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GNPDA2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GNPDA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GNPDA2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GNPDA2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GNPDA2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GNPDA2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GNPDA2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GNPDA2 em células tumorais com expressão de GNPDA2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.