Plasmide Double Nickase (m) GMF-γ: sc-425658-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) GMF-γ correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GMF-γ Double Nickase (m) et le plasmide GMF-γ Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Gmfg. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) GMF-γ | sc-425658-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) GMF-γ | sc-425658-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Gmfg code le facteur de maturation des cellules gliales gamma (GMF-γ), une protéine régulatrice de l’actine enrichie dans les lignées hématopoïétiques et immunitaires, qui module la ramification et la dé-ramification de l’actine dépendantes d’Arp2/3 afin de façonner la dynamique des lamellipodes. En contrôlant le remodelage du cytosquelette, GMF-γ influence la chimiotaxie, l’adhérence et les comportements phagocytaires, ce qui l’associe à des nœuds de signalisation en aval des intégrines et des petites GTPases de la famille Rho qui coordonnent la migration cellulaire. Une activité altérée de GMF-γ peut perturber le trafic des leucocytes et les réponses inflammatoires, faisant de Gmfg un locus utile pour étudier la motilité des cellules immunitaires et les interactions avec le microenvironnement dans des modèles murins. Ces processus sont pertinents pour des investigations mécanistiques du remodelage tissulaire associé à l’inflammation et du dialogue croisé tumeur–système immunitaire, sans préjuger d’effets thérapeutiques.
GMF-γ Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Gmfg dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Gmfg. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Gmfg. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Gmfg.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.