Plasmide CRISPR/Cas9 KO GMF-β (m): sc-425657

Présentation

Le facteur de maturation gliale bêta (GMF-β), codé chez la souris par le gène *Gmfb*, est un régulateur cytosolique conservé du remodelage du cytosquelette d’actine, qui influence les changements de forme cellulaire et la motilité dans des contextes neuronaux et liés à l’immunité. GMF-β interagit avec le complexe Arp2/3 pour moduler la dynamique des ramifications de l’actine, ce qui le relie à des voies contrôlant la croissance des neurites, le remodelage synaptique et les réponses des cellules gliales aux signaux de l’environnement. Dans le système nerveux central, GMF-β a été étudié en lien avec la signalisation neuro-inflammatoire et les programmes d’activation cellulaire associés au stress, où une régulation altérée du cytosquelette peut affecter l’homéostasie tissulaire. Des processus associés à GMF-β dérégulés sont pertinents dans des modèles expérimentaux de neurodégénérescence et de lésions inflammatoires, via des effets sur la migration cellulaire, la gliose réactive et la signalisation dépendante du cytosquelette.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GMF-β (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Gmfb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Gmfb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Gmfb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GMF-β.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Gmfb pour l'étude de la signalisation de GMF-β, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Gmfb essentiels à la fonction de GMF-β
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Gmfb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GMF-β plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GMF-β plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Gmfb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GMF-β plasmide HDR (m) et le GMF-β (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Gmfb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Gmfb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.