Plasmide CRISPR/Cas9 KO GlyT2 (h): sc-403077
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- GlyT2 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique GlyT2, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GlyT2 Antibody (B-4): sc-390090
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO GlyT2 (h) | sc-403077 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
SLC6A5 code pour le transporteur présynaptique de la glycine GlyT2 (famille SLC6), un transporteur dépendant du Na\+/Cl\- qui assure la recapture de la glycine à haute affinité dans les neurones glycinergiques inhibiteurs. En réapprovisionnant la glycine cytosolique destinée au chargement vésiculaire, GlyT2 soutient l’inhibition synaptique rapide dans la moelle épinière et le tronc cérébral et contribue à façonner l’excitabilité des réseaux. Ce transporteur s’inscrit à l’interface des processus de recyclage des neurotransmetteurs et d’homéostasie du chlorure qui régulent le tonus inhibiteur et la sortie des circuits sensorimoteurs. Une perturbation ou une dérégulation de SLC6A5 a été associée à une altération de la signalisation glycinergique et à des phénotypes neurophysiologiques pertinents pour l’hyperekplexie héréditaire et des dysfonctionnements apparentés des synapses inhibitrices.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GlyT2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC6A5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC6A5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC6A5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GlyT2.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC6A5 pour l'étude de la signalisation de GlyT2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de SLC6A5 essentiels à la fonction de GlyT2
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC6A5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le GlyT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GlyT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC6A5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le GlyT2 plasmide HDR (h) et le GlyT2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC6A5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC6A5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.