Plasmide Double Nickase (h) GlyRS: sc-404105-NIC

GARS code la glycyl‑ARNt synthétase humaine (GlyRS), une aminoacyl‑ARNt synthétase cytosolique qui charge l’ARNt^Gly en glycine, fournissant les ARNt aminoacylés nécessaires à la traduction ribosomique. En maintenant la fidélité de la traduction et la protéostasie, la GlyRS soutient des processus fondamentaux, notamment la synthèse protéique, les réponses au stress et les états cellulaires à forte demande énergétique où un débit de traduction élevé est requis. La dérégulation ou les mutations de GARS ont été associées à des phénotypes de neuropathie périphérique, soulignant la sensibilité des systèmes neuronaux et axonaux aux altérations du chargement des ARNt et de l’homéostasie protéique. En tant qu’enzyme de ménage conservée présentant une vulnérabilité dépendante des tissus, la GlyRS est fréquemment étudiée dans des modèles de neurodégénérescence, de stress protéotoxique et de signalisation dépendante de la traduction.

GlyRS Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GARS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GARS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GARS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GARS.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.