Plasmide Double Nickase (h) glypican-1: sc-402002-NIC

Le gène humain **GPC1** code la glypican-1, un protéoglycane à héparane sulfate ancré par glycosylphosphatidylinositol (GPI), enrichi à la surface cellulaire et dans les vésicules extracellulaires. La glypican-1 se lie à des facteurs de croissance et à des morphogènes se liant à l’héparine afin de moduler la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase et les voies de développement, notamment les voies FGF, VEGF, Wnt et Hedgehog, influençant ainsi la prolifération, l’adhésion, la migration et l’organisation de la matrice extracellulaire. Via ses chaînes d’héparane sulfate, elle façonne la disponibilité des ligands et leurs gradients au sein du microenvironnement péricellulaire, et contribue au trafic endocytaire ainsi qu’à l’ajustement fin des signaux. Une expression dérégulée de **GPC1** ou une présentation altérée à la surface a été associée à des modifications de la signalisation du microenvironnement tumoral, à un comportement invasif et à des études de biomarqueurs dans de multiples contextes cancéreux, ce qui étaye son utilisation en oncologie mécanistique et en recherche sur la communication cellulaire.

glypican-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPC1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.