Plasmide Double Nickase (h) Glyoxalase I: sc-401914-NIC

Le gène humain **GLO1** code la glyoxalase I, une métalloenzyme cytosolique qui catalyse la détoxification du méthylglyoxal dépendante du glutathion en convertissant des intermédiaires hémiacétals en **S‑D‑lactoylglutathion**. Cette activité est centrale dans le système des glyoxalases, qui limite l’accumulation de dicarbonyles réactifs et la formation en aval de produits de glycation avancée (AGE), reliant ainsi **GLO1** à l’équilibre rédox cellulaire, à la protéostasie et aux réponses au stress métabolique. Une perturbation de la fonction de la glyoxalase I peut modifier le stress carbonylé associé à la glycolyse et influencer des voies de signalisation et de dommages impliquant la glycation, le stress oxydant et l’inflammation. Les variations d’expression ou d’activité de **GLO1** ont été étudiées dans des contextes tels que les complications liées au diabète, la neurodégénérescence et le métabolisme tumoral, comme indicateur de la capacité de détoxification des dicarbonyles.

Glyoxalase I Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GLO1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GLO1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GLO1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GLO1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.