Plasmide Double Nickase (h) Glycophorin A: sc-417801-NIC

GYPA code la glycophorine A, une sialoglycoprotéine très abondante de la membrane plasmique des érythrocytes, qui contribue à la charge de surface des globules rouges, à l’organisation membranaire et aux interactions avec les composants du plasma. En tant que principal support des antigènes de groupe sanguin M/N et de structures glycanes associées, la glycophorine A soutient les programmes de différenciation érythroïde et influence les interactions cellule–cellule et cellule–pathogène à l’interface membranaire. Les variations et l’expression altérée de GYPA sont pertinentes pour les phénotypes hématologiques, l’immunologie transfusionnelle et la susceptibilité aux agents pathogènes se liant aux érythrocytes, ce qui en fait un locus utile pour étudier la biologie des glycoprotéines membranaires et la présentation antigénique. L’étude expérimentale de GYPA permet d’établir un lien entre l’architecture de surface des érythrocytes, la reconnaissance immunitaire et les processus d’adhésion hôte–microbe.

Glycophorin A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GYPA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GYPA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GYPA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GYPA.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.