Plásmido CRISPR de Activación (h) Glutathione reductase: sc-417499-ACT

GSR codifica la glutatión reductasa, una oxidorreductasa flavoproteica que mantiene la homeostasis redox celular al regenerar glutatión reducido (GSH) a partir de glutatión oxidado (GSSG) utilizando NADPH. Esta reacción es fundamental para la defensa antioxidante, ya que favorece la detoxificación de especies reactivas de oxígeno y preserva el equilibrio redox de los tioles en el citosol y las mitocondrias. Al sostener vías dependientes de GSH, como la actividad de la glutatión peroxidasa y el metabolismo de xenobióticos, GSR influye en la función mitocondrial, el plegamiento proteico y la protección frente al daño oxidativo. La alteración del reciclaje de glutatión y el aumento del estrés oxidativo se asocian con mecanismos implicados en anemia, neurodegeneración, disfunción metabólica y biología del cáncer, lo que convierte a GSR en un nodo útil para estudiar fenotipos impulsados por el estado redox.

Glutathione reductase El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GSR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Glutathione reductase El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GSR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GSR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Glutathione reductase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GSR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Glutathione reductase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Glutathione reductase en células tumorales con expresión de GSR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.