Plasmide Double Nickase (h) Glutathione Peroxidase 3/GPX3: sc-402413-NIC

GPX3 code la glutathion peroxydase 3, une sélénioenzyme sécrétée qui réduit le peroxyde d’hydrogène et les hydroperoxydes lipidiques en utilisant le glutathion comme donneur d’électrons, limitant ainsi le stress oxydatif extracellulaire. En modulant les espèces réactives de l’oxygène dans le microenvironnement, GPX3 influence des voies de signalisation sensibles à l’état rédox ainsi que des processus tels que l’inflammation, le remodelage de la matrice extracellulaire et la survie cellulaire. Une expression altérée de GPX3 a été associée à des phénotypes liés au stress oxydatif et fait fréquemment l’objet d’études dans des contextes incluant le dysfonctionnement métabolique, la biologie cardiovasculaire et la biologie tumorale. GPX3 constitue donc un nœud utile pour disséquer la manière dont la capacité antioxydante extracellulaire façonne l’homéostasie rédox et les réseaux de signalisation en aval.

Glutathione Peroxidase 3/GPX3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPX3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPX3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPX3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPX3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.