Plasmide CRISPR/Cas9 KO Glutathione Peroxidase 3/GPX3 (m): sc-420664

Présentation

La glutathion peroxydase 3 (Gpx3/GPX3) est une sélénioenzyme sécrétée qui réduit le peroxyde d’hydrogène et les hydroperoxydes organiques en utilisant le glutathion, contribuant ainsi à l’homéostasie rédox extracellulaire et limitant les dommages oxydatifs aux protéines et aux lipides. Dans les tissus et le plasma de la souris, GPX3 aide à tamponner les espèces réactives de l’oxygène et interagit fonctionnellement avec le métabolisme du glutathion, les réseaux de défense antioxydante et la signalisation associée à l’inflammation. D’après la littérature, une activité de GPX3 altérée a été associée à des phénotypes de stress oxydatif et à une dérégulation du remodelage tissulaire, avec des effets en aval sur la fonction endothéliale, l’activation des cellules immunitaires et des programmes transcriptionnels sensibles au rédox. Comme le niveau de peroxydes extracellulaires influence des voies telles que MAPK et NF-κB, la perturbation de Gpx3 est fréquemment utilisée pour étudier la signalisation régulée par le rédox et des modèles de lésions oxydatives.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Glutathione Peroxidase 3/GPX3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Gpx3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Gpx3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Gpx3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Glutathione Peroxidase 3/GPX3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Gpx3 pour l'étude de la signalisation de Glutathione Peroxidase 3/GPX3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Gpx3 essentiels à la fonction de Glutathione Peroxidase 3/GPX3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Gpx3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Glutathione Peroxidase 3/GPX3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Glutathione Peroxidase 3/GPX3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Gpx3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Glutathione Peroxidase 3/GPX3 plasmide HDR (m) et le Glutathione Peroxidase 3/GPX3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Gpx3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Gpx3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.