Plasmide CRISPR d'Activation (h) Glutathione Peroxidase 3/GPX3: sc-402413-ACT

Le gène humain **GPX3** code la glutathion peroxydase 3, une sélénoprotéine sécrétée qui réduit le peroxyde d’hydrogène et les hydroperoxydes lipidiques en utilisant le glutathion, limitant ainsi les dommages oxydatifs extracellulaires. GPX3 contribue à l’homéostasie rédox, à la modulation des signaux inflammatoires et à la protection des composants membranaires et de la matrice contre les espèces réactives de l’oxygène, s’inscrivant à l’interface des réseaux de réponse au stress oxydatif et du métabolisme du glutathion. Une expression altérée de GPX3 a été rapportée dans des contextes associés à un déséquilibre rédox, notamment en biologie du cancer, lors de stress métaboliques et au cours de processus de remodelage vasculaire ou tissulaire, où la capacité antioxydante extracellulaire peut influencer la signalisation et les interactions entre les cellules et leur microenvironnement. Ces caractéristiques font de GPX3 une cible utile pour étudier les voies régulées par le rédox, les phénotypes liés au stress oxydatif et la fonction d’antioxydant sécrété dans des modèles cellulaires humains.

Glutathione Peroxidase 3/GPX3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GPX3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Glutathione Peroxidase 3/GPX3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GPX3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GPX3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Glutathione Peroxidase 3/GPX3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GPX3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Glutathione Peroxidase 3/GPX3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Glutathione Peroxidase 3/GPX3 dans les cellules tumorales présentant une expression de GPX3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.