Plasmide CRISPR/Cas9 KO Glutathione Peroxidase 2/GPX2 (h): sc-406827

Présentation

GPX2 code la glutathion peroxydase 2, une enzyme antioxydante sélénium-dépendante qui réduit le peroxyde d’hydrogène et les hydroperoxydes lipidiques en utilisant le glutathion comme donneur d’électrons, limitant ainsi les dommages oxydatifs et préservant l’homéostasie rédox. L’activité de GPX2 s’inscrit dans les mécanismes cellulaires de détoxification des peroxydes et le métabolisme du glutathion, modulant la signalisation dépendante des ROS et protégeant les membranes contre la peroxydation lipidique. Dans les tissus humains, GPX2 est fortement associée à la biologie des barrières épithéliales et aux réponses au stress, et des altérations de son expression ont été liées à un stress oxydatif induit par l’inflammation ainsi qu’à des programmes de prolifération dérégulés. La perturbation de GPX2 peut donc affecter des voies contrôlant l’équilibre rédox, la survie cellulaire face à un stress oxydatif et des réponses transcriptionnelles dépendantes du contexte aux ROS.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Glutathione Peroxidase 2/GPX2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GPX2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GPX2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GPX2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Glutathione Peroxidase 2/GPX2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GPX2 pour l'étude de la signalisation de Glutathione Peroxidase 2/GPX2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GPX2 essentiels à la fonction de Glutathione Peroxidase 2/GPX2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GPX2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Glutathione Peroxidase 2/GPX2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Glutathione Peroxidase 2/GPX2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GPX2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Glutathione Peroxidase 2/GPX2 plasmide HDR (h) et le Glutathione Peroxidase 2/GPX2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GPX2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GPX2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.