Plasmide Double Nickase (m) Glutathione Peroxidase 1/GPX1: sc-420662-NIC

Le gène murin **Gpx1** code la glutathion peroxydase 1 (GPX1), une enzyme antioxydante dépendante du sélénium qui réduit le peroxyde d’hydrogène et les hydroperoxydes lipidiques en utilisant le glutathion, limitant ainsi les dommages oxydatifs aux protéines, aux lipides et à l’ADN. L’activité de GPX1 contribue à l’homéostasie rédox cellulaire et s’inscrit à l’interface du métabolisme du glutathion, de la détoxification des peroxydes et de voies de signalisation sensibles au stress qui influencent la fonction mitochondriale et les réponses inflammatoires. Des altérations de l’expression ou de l’activité de GPX1 ont été associées à des phénotypes de stress oxydatif pertinents pour le dysfonctionnement métabolique, la neurodégénérescence et les pathologies cardiovasculaires, dans lesquels une gestion dérégulée des ROS contribue aux lésions cellulaires. En tant qu’enzyme cytosolique/peroxysomale largement exprimée, GPX1 est fréquemment étudiée comme un nœud reliant l’équilibre rédox à la régulation génique et aux réponses adaptatives au stress.

Glutathione Peroxidase 1/GPX1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Gpx1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Gpx1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Gpx1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Gpx1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.