Plasmide Double Nickase (h) GluR-δ2: sc-403400-NIC

GRID2 code le récepteur du glutamate delta-2 (GluR-δ2), un membre de la famille des récepteurs ionotropes du glutamate, fortement enrichi dans les neurones de Purkinje du cervelet et dont la fonction principale est celle d’un organisateur synaptique plutôt que d’un canal ligand‑dépendant canonique. GluR-δ2 participe à des complexes de signalisation transsynaptiques qui régulent la formation des synapses entre les fibres parallèles et les cellules de Purkinje, le maintien synaptique et la plasticité dépendante de l’activité, en influençant des voies intracellulaires liées au remodelage des épines dendritiques et à la dépression à long terme. Une altération de la fonction ou de l’expression de GRID2 est associée à une perturbation des circuits cérébelleux et a été impliquée dans des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs caractérisés par une coordination motrice déficiente et une ataxie. En conséquence, GRID2 est fréquemment étudié dans les mécanismes de synaptogenèse, la spécification des synapses excitatrices et la physiologie des réseaux cérébelleux.

GluR-δ2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GRID2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GRID2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GRID2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GRID2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.