Plasmide Double Nickase (m) GluR-3: sc-424739-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) GluR-3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GluR-3 Double Nickase (m) et le plasmide GluR-3 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Gria3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GluR-3 Antibody (1D2E2): sc-517202
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) GluR-3 | sc-424739-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) GluR-3 | sc-424739-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Gria3 code la sous-unité du récepteur au glutamate de type AMPA GluR-3, un canal ionique ligand‑dépendant qui assure une neurotransmission excitatrice rapide dans le système nerveux central de la souris. Les récepteurs contenant GluR-3 régulent la transmission synaptique et la plasticité via un trafic et une phosphorylation dépendants de l’activité, modulant des processus tels que la potentialisation à long terme et le remodelage des épines dendritiques. En contrôlant la conductance Na\+/K\+ et la signalisation en aval dépendante du Ca2\+, GRIA3 s’insère dans des voies comprenant MAPK/ERK, CAMKII et des programmes de gènes à réponse immédiate qui couplent l’activité neuronale aux réponses transcriptionnelles. Des altérations de la composition des récepteurs AMPA ou de leur signalisation ont été impliquées dans des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques ainsi que dans des réponses au stress excitotoxique, faisant de Gria3 une cible utile pour des études mécanistiques du fonctionnement des circuits.
GluR-3 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Gria3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Gria3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Gria3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Gria3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.