Plasmide Double Nickase (h) Glucosidase I: sc-405014-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Glucosidase I correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Glucosidase I Double Nickase (h) et le plasmide Glucosidase I Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MOGS. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Glucosidase I Antibody (C-11): sc-374006
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Glucosidase I | sc-405014-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Glucosidase I | sc-405014-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **MOGS** code la **glucosidase I**, une **α‑glucosidase** associée à la membrane du **réticulum endoplasmique (RE)** qui catalyse la première étape d’élagage des résidus glucose lors du traitement des **glycanes N‑liés** sur les glycoprotéines naissantes. Cette déglucosylation précoce favorise le repliement des glycoprotéines et les cycles de contrôle qualité du RE impliquant **calnexine/calréticuline**, influençant la maturation des protéines et le flux de la voie sécrétoire. En modulant le trafic et la stabilité, dépendants des glycanes, des protéines membranaires et sécrétées, l’activité de MOGS s’inscrit au croisement de la protéostasie, des réponses au stress du RE et des interactions hôte–pathogène dépendantes de la glycosylation. Des altérations génétiques ou fonctionnelles de **MOGS** ont été associées à des phénotypes liés aux **troubles congénitaux de la glycosylation** et sont pertinentes pour des études mécanistiques de la biogenèse des glycoprotéines dans les cellules humaines.
Glucosidase I Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MOGS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MOGS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MOGS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MOGS.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.