Glucosidase I Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405014

Descripción general

MOGS codifica la glucosidasa I, una enzima del lumen del retículo endoplásmico (RE) que inicia el procesamiento de los glicanos N‑ligados al eliminar la glucosa terminal unida por enlace α‑1,2 del Glc₃Man₉GlcNAc₂ en glicoproteínas recién sintetizadas. Este paso temprano de recorte coordina la entrada en el ciclo de control de calidad de calnexina/calreticulina, influyendo en el plegamiento proteico, la degradación asociada al RE y la maduración de la vía secretora. La alteración de MOGS perturba la proteostasis y modifica la composición de las glicoproteínas en la superficie celular y en las proteínas secretadas, con efectos posteriores sobre el tráfico de receptores y el reconocimiento inmunitario. La variación genética o la pérdida funcional de la glucosidasa I se ha asociado a trastornos congénitos de la glicosilación y a fenotipos más amplios vinculados al estrés del RE, lo que la hace relevante para el estudio de procesos celulares dependientes de glicoproteínas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Glucosidase I (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MOGS en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MOGS junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MOGS tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Glucosidase I.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MOGS para la investigación de la señalización de Glucosidase I, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MOGS críticos para la función de Glucosidase I
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MOGS para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Glucosidase I CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Glucosidase I CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MOGS. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Glucosidase I (h) y el plásmido HDR Glucosidase I (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MOGS para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MOGS definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.