Plasmide Double Nickase (m) Glucose Transporter Glut8: sc-424976-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Glucose Transporter Glut8 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Glucose Transporter Glut8 Double Nickase (m) et le plasmide Glucose Transporter Glut8 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Slc2a8. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) Glucose Transporter Glut8 | sc-424976-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc2a8 code le transporteur de glucose GLUT8 (SLC2A8), un transporteur facilité d’hexoses qui contribue à l’absorption cellulaire des glucides et à la gestion intracellulaire du glucose dans les tissus de souris. L’activité de GLUT8 influence l’homéostasie énergétique en modulant le flux glycolytique et la disponibilité des substrats pour le métabolisme oxydatif, en interaction avec l’utilisation du glucose sensible à l’insuline et avec des voies de détection des nutriments telles qu’AMPK et mTOR. Au-delà du métabolisme systémique, SLC2A8 a été associé à la physiologie reproductive et neuronale, où un transport du glucose altéré peut affecter la viabilité cellulaire et la différenciation. La dérégulation du transport du glucose et la reprogrammation métabolique sont largement pertinentes pour les mécanismes liés à l’obésité, à la résistance à l’insuline et au diabète, ce qui justifie l’étude de Slc2a8 dans le stress métabolique et la gestion du glucose spécifique aux tissus.
Glucose Transporter Glut8 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Slc2a8 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Slc2a8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Slc2a8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Slc2a8.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.