Plasmide CRISPR d'Activation (h) Glucose Transporter Glut5: sc-401907-ACT

SLC2A5 code pour le transporteur de glucose Glut5, un transporteur membranaire de type facilitateur, hautement spécifique du fructose, qui assure l’absorption des hexoses à travers la membrane plasmique et contribue à l’équilibre énergétique cellulaire ainsi qu’au flux de carbone. Le transport médié par Glut5 influence les points d’entrée dans la glycolyse et s’articule avec les programmes de détection des nutriments, reliant la disponibilité extracellulaire des sucres à la reprogrammation métabolique. Des altérations de l’expression de SLC2A5 ont été étudiées dans des contextes tels que l’absorption intestinale du fructose, le stress métabolique et l’utilisation des nutriments par les cellules tumorales, où des modifications du transport du fructose peuvent affecter la prolifération et le métabolisme oxydatif. En tant que transporteur de surface cellulaire, Glut5 constitue également une cible accessible pour étudier le trafic membranaire, la compétition de substrats entre les membres de la famille SLC2 et les dépendances aux voies métaboliques.

Glucose Transporter Glut5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC2A5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Glucose Transporter Glut5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC2A5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC2A5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Glucose Transporter Glut5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC2A5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Glucose Transporter Glut5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Glucose Transporter Glut5 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC2A5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.