Plasmide CRISPR d'Activation (h) Glucose Transporter Glut4: sc-400158-ACT

SLC2A4 code le transporteur de glucose Glut4, un transporteur facilité sensible à l’insuline qui assure une captation du glucose dépendante des stimuli dans les adipocytes et le muscle squelettique. Lors de la signalisation de l’insuline via l’axe PI3K–AKT, Glut4 se relocalise depuis des vésicules de stockage intracellulaires vers la membrane plasmique, reliant l’activation du récepteur à l’utilisation cellulaire du glucose et à la synthèse de glycogène. Le trafic de Glut4 est également modulé par des voies de stress métabolique dépendantes de l’AMPK et par la machinerie de fusion vésiculaire, intégrant la disponibilité en nutriments au maintien de l’homéostasie énergétique. Une expression dérégulée de SLC2A4 ou une translocation déficiente de Glut4 est impliquée dans la résistance à l’insuline et des phénotypes de maladies métaboliques, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude de la gestion du glucose dans des modèles cellulaires humains.

Glucose Transporter Glut4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC2A4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Glucose Transporter Glut4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC2A4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC2A4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Glucose Transporter Glut4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC2A4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Glucose Transporter Glut4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Glucose Transporter Glut4 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC2A4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.