Plasmide CRISPR d'Activation (h) Glucose Transporter Glut3: sc-400584-ACT

SLC2A3 code pour le transporteur de glucose Glut3 (GLUT3), un transporteur de glucose facilitateur à haute affinité qui permet une captation rapide du glucose dans les cellules à forte demande énergétique. En régulant la disponibilité intracellulaire en glucose, GLUT3 influence le flux glycolytique, la production d’ATP et les voies de signalisation métaboliques en aval qui coordonnent la prolifération, la différenciation et les réponses au stress. Une expression altérée de SLC2A3 a été associée à une reprogrammation métabolique et à des programmes d’adaptation à l’hypoxie, et fait fréquemment l’objet d’études dans des contextes tels que l’inflammation, la neurobiologie et le métabolisme associé aux tumeurs. En tant que transporteur de la membrane plasmique, GLUT3 fournit également un indicateur fonctionnel mesurable via des variations de la captation de glucose et de la production de lactate.

Glucose Transporter Glut3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC2A3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Glucose Transporter Glut3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC2A3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC2A3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Glucose Transporter Glut3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC2A3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Glucose Transporter Glut3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Glucose Transporter Glut3 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC2A3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.