Glucose Transporter Glut2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400347-ACT

SLC2A2 kodiert den erleichterten Glukosetransporter GLUT2, einen Transporter mit niedriger Affinität und hoher Kapazität, der einen bidirektionalen Glukosefluss über die Plasmamembran ermöglicht. Beim Menschen trägt GLUT2 zur Glukosesensorik und zur metabolischen Homöostase in Geweben wie Leber, pankreatischen β‑Zellen, Niere und Darm bei und beeinflusst dabei Glykolyse, Glukoneogenese und die Dynamik der Insulinsekretion. Seine Aktivität ist in Signal- und Stoffwechselwege des Kohlenhydrat- und Energiestoffwechsels eingebunden, indem er die zelluläre Glukoseverfügbarkeit und nachgeschaltete Signalantworten reguliert. Eine veränderte Expression oder Funktion von SLC2A2 wurde mit Phänotypen metabolischer Dysregulation in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Untersuchungen der Glukoseverarbeitung und nährstoffabhängiger Transkriptionsprogramme macht.

Glucose Transporter Glut2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLC2A2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Glucose Transporter Glut2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLC2A2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLC2A2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Glucose Transporter Glut2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLC2A2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Glucose Transporter Glut2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Glucose Transporter Glut2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLC2A2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.