Plasmide Double Nickase (h) Glucose Transporter Glut1: sc-400174-NIC

SLC2A1 code le transporteur facilitateur de glucose GLUT1, un transporteur à haute affinité qui assure l'absorption basale de glucose à travers la membrane plasmique afin de soutenir la glycolyse et le métabolisme oxydatif. L'activité de GLUT1 contribue à l'homéostasie énergétique et à l'équilibre rédox, influençant la reprogrammation métabolique dans les états prolifératifs et permettant aux cellules de s'adapter à l'hypoxie via des programmes transcriptionnels régulés par HIF. En tant que déterminant majeur de la disponibilité en glucose, SLC2A1 s'articule avec les voies de signalisation AMPK et mTOR par des boucles de rétroaction de détection des nutriments et affecte des processus tels que l'angiogenèse, le transport au niveau de la barrière hémato-encéphalique et l'activation des cellules immunitaires. Une expression ou une fonction altérée de SLC2A1 est associée à une dysrégulation métabolique et a été impliquée dans le métabolisme tumoral ainsi que dans des défauts neurologiques de transport du glucose.

Glucose Transporter Glut1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SLC2A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SLC2A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SLC2A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SLC2A1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.