Particules Lentivirales d'Activation (h) Glucagon Receptor: sc-402018-LAC

GCGR code le récepteur humain du glucagon, un récepteur couplé aux protéines G de classe B qui se lie au glucagon afin de réguler la production hépatique de glucose et l’homéostasie énergétique de l’organisme. Lors de son activation, GCGR se couple principalement à Gαs, ce qui augmente l’AMPc et active la PKA ainsi que des programmes transcriptionnels dépendants de CREB qui contrôlent la glycogénolyse, la gluconéogenèse et le métabolisme lipidique. La signalisation du récepteur interagit également avec la mobilisation du calcium et les voies MAPK, modulant des réseaux de gènes métaboliques dans les hépatocytes et d’autres tissus répondeurs. Une activité dérégulée de GCGR a été associée à des phénotypes pertinents pour les maladies métaboliques, notamment une altération du contrôle glycémique, un déséquilibre de l’axe insuline–glucagon et un remodelage métabolique hépatique.

Les particules d'activation lentivirales Glucagon Receptor (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de GCGR dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Glucagon Receptor (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription GCGR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Glucagon Receptor. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif GCGR ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.