Plasmide CRISPR d'Activation (h) Glucagon Receptor: sc-402018-ACT

GCGR code le récepteur humain du glucagon, un récepteur couplé aux protéines G de classe B qui se lie au glucagon et se couple principalement à Gαs pour stimuler l’adénylate cyclase, augmenter l’AMPc et activer des programmes transcriptionnels dépendants de la PKA. Cet axe de signalisation régule la production hépatique de glucose, la glycogénolyse et le métabolisme lipidique, et interagit avec l’expression génique médiée par CREB, les réponses au stress métabolique et le contrôle endocrinien de l’homéostasie énergétique. Une expression ou une signalisation altérée de GCGR a été impliquée dans une dérégulation de la gestion du glucose et des lipides et est fréquemment étudiée dans le contexte de la biologie des maladies métaboliques. En tant que récepteur membranaire doté de lectures en aval bien définies, GCGR constitue un nœud expérimentalement accessible pour disséquer les voies induites par les hormones dans les hépatocytes et d’autres types cellulaires pertinents.

Glucagon Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GCGR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Glucagon Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GCGR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GCGR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Glucagon Receptor. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GCGR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Glucagon Receptor au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Glucagon Receptor dans les cellules tumorales présentant une expression de GCGR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.