Plasmide CRISPR/Cas9 KO GLI-3 (m): sc-420577

Présentation

Gli3 code GLI-3, un facteur de transcription à doigts de zinc qui, selon le contexte, agit comme activateur ou répresseur dans la voie de signalisation Hedgehog, en intégrant les signaux issus des cils primaires pour réguler les programmes d’expression génique du développement. Chez la souris, GLI-3 est essentiel à la mise en place des patrons de développement des membres, du tube neural et des structures craniofaciales, en contrôlant les sorties transcriptionnelles en aval de PTCH1/SMO et en modulant l’activité de la famille GLI. Le traitement protéolytique et la régulation post-traductionnelle de GLI-3 contribuent à établir des gradients de morphogènes et la formation de frontières au cours de l’embryogenèse. Une activité de Gli3 dérégulée est associée à des phénotypes de malformations congénitales et sert fréquemment de modèle pour étudier l’homéostasie tissulaire dépendante de Hedgehog ainsi que le remaniement oncogénique des voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GLI-3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Gli3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Gli3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Gli3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GLI-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Gli3 pour l'étude de la signalisation de GLI-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Gli3 essentiels à la fonction de GLI-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Gli3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GLI-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GLI-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Gli3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GLI-3 plasmide HDR (m) et le GLI-3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Gli3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Gli3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.