GLI-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400839-ACT

GLI2 codifica o GLI-2, um fator de transcrição com dedos de zinco que atua como o principal efetor nuclear da sinalização Hedgehog a jusante de PTCH1 e SMO. Ao se ligar a elementos consenso de GLI, o GLI-2 regula programas transcricionais que controlam o padrão embrionário, decisões de destino celular, manutenção de células-tronco/progenitoras e a proliferação e diferenciação dependentes do contexto. A atividade de GLI2 é modulada por processamento proteolítico, fosforilação e interações com SUFU e outros cofatores, integrando o crosstalk com vias como TGF-β, WNT e PI3K/AKT. A expressão ou ativação desregulada de GLI2 está associada a anomalias do desenvolvimento e é frequentemente implicada em estados transcricionais oncogênicos em múltiplos contextos tumorais, sustentando seu uso em estudos de vias e mecanismos de doença.

GLI-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GLI2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GLI-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GLI2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GLI2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GLI-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GLI2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GLI-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GLI-2 em células tumorais com expressão de GLI2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.