Plásmido Doble Nickase (h) GLI-1/GLI1: sc-400266-NIC

GLI1 codifica un factor de transcripción con dedos de zinc que actúa como el principal efector terminal de la señalización Hedgehog, integrando señales aguas arriba derivadas de la actividad de PTCH1/SMO para regular programas de expresión génica que controlan la proliferación, la diferenciación y el patrón tisular. GLI-1/GLI1 modula la transcripción de dianas de la vía implicadas en la progresión del ciclo celular, fenotipos tipo célula madre y programas epitelio–mesénquima, y participa en la regulación por retroalimentación dentro de la red Hedgehog. La actividad desregulada de GLI1 se asocia con una señalización del desarrollo aberrante y se estudia con frecuencia en contextos de activación oncogénica de la vía, donde contribuye a una reprogramación transcripcional y a una identidad celular alterada. Como regulador nuclear que se une al ADN, GLI1 constituye un nodo manejable para analizar el control transcripcional dependiente de señales y las redes génicas downstream en sistemas modelo humanos.

GLI-1/GLI1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GLI1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GLI1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GLI1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GLI1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.