GLI-1/GLI1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400266-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GLI-1/GLI1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GLI-1/GLI1 Double-Nickase-Plasmid (h) und GLI-1/GLI1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GLI1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GLI-1/GLI1: sc-515751
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GLI-1/GLI1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400266-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GLI-1/GLI1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400266-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GLI1 kodiert einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der als zentraler terminaler Effektor der Hedgehog-Signalübertragung fungiert und upstream-Signale aus der PTCH1/SMO-Aktivität integriert, um Genexpressionsprogramme zu regulieren, die Proliferation, Differenzierung und Gewebemusterbildung steuern. GLI-1/GLI1 moduliert die Transkription von Signalweg-Zielgenen, die an Zellzyklusprogression, stammzellähnlichen Phänotypen und epithelial–mesenchymalen Programmen beteiligt sind, und wirkt an der Feedback-Regulation innerhalb des Hedgehog-Netzwerks mit. Eine dysregulierte GLI1-Aktivität ist mit fehlgeleiteter Entwicklungssignalgebung verknüpft und wird häufig im Kontext einer onkogenen Aktivierung des Signalwegs untersucht, wo sie zu einer transcriptionellen Umprogrammierung und veränderter zellulärer Identität beiträgt. Als nukleärer, DNA-bindender Regulator stellt GLI1 einen gut zugänglichen Knotenpunkt dar, um signalabhängige Transkriptionskontrolle und nachgeschaltete Gen-Netzwerke in humanen Modellsystemen zu untersuchen.
GLI-1/GLI1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GLI1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GLI1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GLI1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GLI1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.