Plasmide CRISPR d'Activation (h) GLI-1/GLI1: sc-400266-ACT

GLI1 code un facteur de transcription à doigts de zinc qui agit comme effecteur terminal central de la signalisation Hedgehog, en intégrant les signaux en amont provenant de PTCH1 et de SMO afin de réguler des programmes géniques contrôlant la prolifération, la différenciation et la mise en place des tissus. Dans le noyau, GLI-1 se fixe aux éléments consensus GLI pour moduler l’expression de cibles impliquées dans la progression du cycle cellulaire, les états de type « cellules souches » et la transition épithélio-mésenchymateuse. Les interactions avec des voies telles que TGF-β, MAPK et PI3K/AKT peuvent ajuster l’activité transcriptionnelle de GLI1 et les phénotypes spécifiques au contexte. Une activité dérégulée de GLI1 est fréquemment utilisée comme marqueur moléculaire d’une signalisation anormale de la voie Hedgehog dans les cancers et d’autres troubles du développement.

GLI-1/GLI1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GLI1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GLI-1/GLI1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GLI1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GLI1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GLI-1/GLI1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GLI1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GLI-1/GLI1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GLI-1/GLI1 dans les cellules tumorales présentant une expression de GLI1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.