Plasmide Double Nickase (h) GLDC: sc-403511-NIC

GLDC code la glycine décarboxylase, la protéine P du système mitochondrial de clivage de la glycine, qui catalyse la décarboxylation de la glycine et transfère l’unité à un carbone ainsi produite au tétrahydrofolate. Par cette réaction, GLDC relie le catabolisme de la glycine au métabolisme des unités monocarbonées dépendant des folates, influençant l’équilibre rédox mitochondrial, la biosynthèse des nucléotides et la capacité de méthylation cellulaire. L’activité de GLDC s’intègre à l’homéostasie des acides aminés et aux voies énergétiques mitochondriales en contribuant à la production de NADH et en régulant le flux de carbone dérivé de la glycine. Un dérèglement ou une perte de fonction de GLDC est associé(e) à une altération de la prise en charge de la glycine et à des perturbations des voies du métabolisme monocarboné, pertinentes pour les erreurs innées du métabolisme et pour des dépendances métaboliques contextuelles observées dans des modèles de maladie.

GLDC Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GLDC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GLDC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GLDC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GLDC.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.