GIT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424063

Übersicht

GIT2 (G protein-gekoppelte Rezeptorkinase-interagierende ArfGAP 2) ist ein ARF-GTPase-aktivierendes Scaffold-Protein, das Membrantransport und zytoskelettales Remodeling koordiniert, indem es Signale von GPCR-assoziierten Kinasen und kleinen GTPasen integriert. In Mauszellen wirkt GIT2 in Paxillin/PIX/PAK-Signalkomplexen, um den Umsatz fokaler Adhäsionen, die Zellspreizung und die gerichtete Migration zu regulieren, und koppelt diese Prozesse an die Aktin-Dynamik und die Endozytose. Es trägt zudem zu stressresponsiver Signalübertragung und zur Internalisierung von Rezeptoren bei und verknüpft damit Adhäsions- und Signalnetzwerke, die zelluläre Antworten auf Umweltsignale formen. Fehlregulierte GIT2-assoziierte Signalwege wurden in Zusammenhängen untersucht, die mit veränderter Motilität und entzündlicher Signalgebung einhergehen, was seine Relevanz für mechanistische Studien des Gewebeumbaus und krankheitsassoziierten Zellverhaltens unterstreicht.

Das GIT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Git2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Git2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Git2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GIT2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Git2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GIT2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Git2-Exone abzielen, die für die GIT2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Git2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GIT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom GIT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Git2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GIT2 HDR-Plasmid (m) und GIT2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Git2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Git2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.