Plasmide CRISPR d'Activation (h) GIPR: sc-402895-ACT

Le gène humain **GIPR** code le récepteur du polypeptide insulinotrope dépendant du glucose (GIP), un RCPG de classe B exprimé dans les îlots pancréatiques et d’autres tissus métaboliquement actifs. Il se couple principalement à **Gs**, ce qui augmente l’**AMPc** et active une transcription dépendante de **PKA/CREB**. La signalisation de GIPR module la sécrétion d’insuline stimulée par le glucose, la survie des cellules β et des programmes anaboliques induits par les nutriments, avec en plus des interactions avec les voies **PI3K/AKT** et **ERK/MAPK** qui influencent la croissance cellulaire et les réponses au stress. Des altérations de l’expression ou de la signalisation de GIPR ont été impliquées dans des dérégulations métaboliques, notamment des phénotypes associés à l’obésité et au diabète de type 2, et GIPR est également utilisé comme marqueur de l’état de lignée endocrinienne. En conséquence, GIPR est largement étudié en biologie des récepteurs hormonaux, dans la fonction des îlots pancréatiques et au sein des réseaux géniques régulés par l’AMPc, pertinents pour les mécanismes des maladies métaboliques.

GIPR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GIPR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GIPR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GIPR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GIPR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GIPR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GIPR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GIPR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GIPR dans les cellules tumorales présentant une expression de GIPR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.