Plasmide Double Nickase (h) GHS-R1: sc-401724-NIC

GHSR code le récepteur 1 des sécrétagogues de l’hormone de croissance (GHS‑R1), un GPCR de classe A répondant à la ghréline, qui régule l’appétit, l’homéostasie énergétique et la signalisation neuroendocrinienne. Lors de la liaison du ligand, GHS‑R1 se couple principalement à Gq/11 pour activer la phospholipase C, augmenter le Ca2+ intracellulaire et moduler la signalisation MAPK/ERK, avec, dans certains contextes cellulaires, un biais supplémentaire vers des voies dépendantes de Gi/o. Ce récepteur est largement étudié dans les circuits hypothalamiques et hypophysaires ainsi que dans des tissus périphériques, où il intègre des signaux métaboliques à la libération d’hormone de croissance et à des sorties autonomes. Une dérégulation de la signalisation de GHSR a été impliquée dans des phénotypes liés à l’obésité, la sensibilité à l’insuline et des altérations des voies de la récompense et du stress, ce qui étaye sa pertinence dans des modèles de recherche métabolique et neuropsychiatrique.

GHS-R1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GHSR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GHSR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GHSR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GHSR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.