Plasmide Double Nickase (h) GHRH-R: sc-404197-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GHRH-R correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GHRH-R Double Nickase (h) et le plasmide GHRH-R Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GHRHR. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GHRH-R | sc-404197-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GHRH-R | sc-404197-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GHRHR code le récepteur de l’hormone de libération de l’hormone de croissance (GHRH‑R), un RCPG de classe B exprimé de façon marquée dans les somatotrophes de l’antéhypophyse, où il se lie à la GHRH hypothalamique afin de réguler la synthèse et la sécrétion de l’hormone de croissance. L’activation du récepteur mobilise principalement la voie Gs–adénylate cyclase, augmentant l’AMPc et activant des programmes transcriptionnels dépendants de la PKA, avec un couplage supplémentaire aux voies MAPK et dépendantes du calcium, qui influencent la prolifération et la différenciation des cellules endocrines. Les variations de fonction de GHRHR sont liées à une dérégulation de l’axe somatotrope et ont été associées à des phénotypes de déficit en hormone de croissance ainsi qu’à des anomalies du développement hypophysaire. Dans les tissus périphériques et des modèles tumoraux, la signalisation GHRH/GHRHR a également été utilisée pour étudier la transcription induite par l’AMPc, le contrôle du cycle cellulaire et les réseaux paracrines de facteurs de croissance.
GHRH-R Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GHRHR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GHRHR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GHRHR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GHRHR.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.