Plasmide CRISPR d'Activation (m) ghrelin: sc-425542-ACT

Le gène murin **Ghrl** code la ghréline, une hormone peptidique sécrétée principalement produite par l’estomac, qui transmet son signal via le récepteur des sécrétagogues de l’hormone de croissance afin de coordonner l’équilibre énergétique et la fonction neuroendocrinienne. La ghréline régule l’appétit, l’adiposité, l’homéostasie du glucose, la motilité gastro-intestinale et la libération de l’hormone de croissance, en intégrant l’état métabolique périphérique aux réseaux de signalisation hypothalamiques et hypophysaires. Les processus en aval croisent la détection des nutriments dépendante de l’AMPK ainsi que des circuits contrôlant la récompense, les réponses au stress et l’inflammation. Des altérations de la signalisation de la ghréline ont été associées à des phénotypes d’obésité et de syndrome métabolique, ainsi qu’à la cachexie, à l’insulinorésistance et à des modifications neurocomportementales dans des modèles expérimentaux.

ghrelin Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ghrl sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ghrelin Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ghrl dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ghrl, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ghrelin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ghrl natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ghrelin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ghrelin dans les cellules tumorales présentant une expression de Ghrl silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.