Plasmide Double Nickase (m) GH: sc-420548-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) GH correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GH Double Nickase (m) et le plasmide GH Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Gh. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GH Antibody (B-10): sc-515021
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) GH | sc-420548-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène **Gh** de la souris code l’hormone de croissance (GH), un facteur endocrinien d’origine hypophysaire qui régule la croissance somatique postnatale, la répartition des nutriments et l’homéostasie métabolique. La signalisation de la GH est initiée par la liaison au récepteur de l’hormone de croissance, suivie de l’activation de JAK2/STAT5, avec en plus une communication croisée avec les voies PI3K–AKT et MAPK qui influencent des programmes transcriptionnels dans le foie, le muscle, le tissu adipeux et l’os. Dans des modèles expérimentaux, une activité modifiée de l’axe GH module la production d’IGF-1, la sensibilité à l’insuline, la mobilisation des lipides et le remodelage squelettique, établissant des liens mécanistiques avec des phénotypes de croissance et des traits associés aux maladies métaboliques. La perturbation de **Gh** est donc utilisée pour étudier la régulation endocrinienne du développement, du métabolisme et des réseaux géniques spécifiques des tissus.
GH Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Gh dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Gh. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Gh. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Gh.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.