Plasmide CRISPR/Cas9 KO GH-2 (h): sc-401171

Présentation

Le gène humain **GH2** code l’hormone de croissance 2 (GH‑2), une hormone peptidique d’origine hypophysaire qui active la signalisation du récepteur de l’hormone de croissance afin de réguler la croissance somatique, la répartition des nutriments et l’homéostasie métabolique. L’activité des voies en aval comprend des programmes transcriptionnels **JAK2/STAT**, avec des interactions croisées avec la régulation de l’axe **IGF**, influençant la prolifération cellulaire, la différenciation et le remodelage tissulaire. Une altération de la signalisation de l’hormone de croissance a été associée à des phénotypes endocriniens et métaboliques et est pertinente pour l’étude d’un contrôle de la croissance dérégulé dans des contextes liés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GH-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GH2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GH2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GH2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GH-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GH2 pour l'étude de la signalisation de GH-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GH2 essentiels à la fonction de GH-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GH2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GH-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GH-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GH2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GH-2 plasmide HDR (h) et le GH-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GH2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GH2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.