Plasmide Double Nickase (h) GGT5: sc-405055-NIC

Le gène humain **GGT5** code la gamma‑glutamyltransférase 5, une ectoenzyme de surface cellulaire qui catalyse des réactions de transfert gamma‑glutamyl impliquées dans le métabolisme du glutathion et des leucotriènes. En traitant des substrats gamma‑glutamylés, GGT5 contribue au renouvellement extracellulaire du glutathion, à la récupération des acides aminés et à l’homéostasie redox, avec des effets en aval sur la signalisation du stress oxydant et les voies inflammatoires. Son activité recoupe la biologie des eicosanoïdes via la conversion du leucotriène C4 et peut moduler les réponses cellulaires dans des contextes immunitaires et épithéliaux. Des altérations de l’expression ou de l’activité de GGT5 ont été étudiées en lien avec l’inflammation tissulaire, le stress métabolique et des processus micro‑environnementaux associés aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des réseaux redox et des médiateurs lipidiques.

GGT5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GGT5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GGT5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GGT5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GGT5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.