GFRP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405353-ACT

O gene humano **GCHFR** codifica a **proteína reguladora por feedback da GTP ciclo-hidrolase I (GFRP)**, um modulador alostérico chave da **GTP ciclo-hidrolase I (GCH1)** que ajusta a biossíntese *de novo* de **tetrahidrobiopterina (BH4)**. Ao integrar sinais provenientes de BH4 e da fenilalanina, a GFRP ajuda a manter a homeostase do cofator que sustenta a hidroxilação de aminoácidos aromáticos e a atividade da óxido nítrico sintase, influenciando a produção de neurotransmissores e a sinalização sensível ao estado redox. Essa regulação conecta o GCHFR ao controle metabólico de processos vasculares e imunes dependentes de NO e às vias de biossíntese de monoaminas no sistema nervoso. A desregulação da disponibilidade de BH4 e alterações no controle GCH1–GFRP têm sido associadas a fenótipos relevantes para a sinalização da dor, disfunção endotelial e desequilíbrio de neurotransmissores, tornando o GCHFR um ponto útil para estudos focados em vias.

GFRP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GCHFR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GFRP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GCHFR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GCHFR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GFRP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GCHFR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GFRP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GFRP em células tumorais com expressão de GCHFR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.