Plasmide CRISPR d'Activation (h) GFRαL: sc-415831-ACT

Le gène humain **GFRAL** (GDNF family receptor alpha-like) code **GFRαL**, un co‑récepteur ancré à la membrane par un **GPI** qui confère une spécificité de ligand à la signalisation de **RET** en réponse à **GDF15**. Ce complexe récepteur est enrichi dans les neurones du rhombencéphale et relie des signaux extracellulaires à des cascades de kinases intracellulaires telles que **MAPK/ERK** et **PI3K/AKT**, modulant l’activité neuronale et des programmes transcriptionnels impliqués dans l’équilibre énergétique systémique. Une activité altérée de l’axe **GDF15–GFRαL–RET** a été associée à une dérégulation métabolique et à des mécanismes liés à la cachexie, faisant de **GFRAL** un point d’entrée utile pour disséquer le contrôle neuroendocrinien de l’appétit et les variations pondérales associées au stress. *In vitro*, la modulation de l’expression de **GFRAL** permet d’étudier le trafic du récepteur, la signalisation dépendante du ligand et les réseaux géniques en aval dans des modèles cellulaires neuronaux pertinents ou des cellules d’ingénierie.

GFRαL Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GFRAL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GFRαL Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GFRAL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GFRAL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GFRαL. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GFRAL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GFRαL au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GFRαL dans les cellules tumorales présentant une expression de GFRAL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.