Plasmide Double Nickase (h) GFRα-3: sc-405061-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GFRα-3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GFRα-3 Double Nickase (h) et le plasmide GFRα-3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GFRA3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GFRα-3 Antibody (C-3): sc-398618
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GFRα-3 | sc-405061-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GFRα-3 | sc-405061-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GFRA3 code le récepteur humain de la famille du GDNF alpha-3 (GFRα-3), un co‑récepteur ancré au glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui se lie à l’artémine et couple la reconnaissance du ligand à la signalisation de la tyrosine kinase RET. Ce complexe récepteur active en aval les voies MAPK/ERK, PI3K/AKT et PLCγ, qui régulent la survie neuronale, la différenciation et le guidage axonal, et contribue également au fonctionnement des neurones sensoriels périphériques. La signalisation de GFRA3 est étroitement liée au contrôle neurotrophique de la sensibilisation des nocicepteurs et du traitement de la douleur inflammatoire, et des altérations de son expression ont été étudiées dans des contextes de lésion nerveuse, de mécanismes de douleur neuropathique et d’interactions tumeur–nerf. En tant que co‑récepteur de surface cellulaire, GFRα-3 constitue un point d’entrée exploitable pour disséquer la dynamique, spécifique au ligand, de la voie RET et les interactions neuro‑immunes.
GFRα-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GFRA3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GFRA3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GFRA3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GFRA3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.