GFRα-3 Plasmide Double Nickase (h): sc-405061-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GFRα-3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GFRα-3 Double Nickase Plasmid (h) e il GFRα-3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GFRA3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GFRα-3 Antibody (C-3): sc-398618
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GFRα-3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405061-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GFRα-3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405061-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GFRA3 codifica il recettore umano della famiglia GDNF alfa-3 (GFRα-3), un co-recettore ancorato tramite glicosilfosfatidilinositolo (GPI) che lega l’artemina e collega il riconoscimento del ligando alla segnalazione della tirosin-chinasi RET. Questo complesso recettoriale attiva a valle le vie MAPK/ERK, PI3K/AKT e PLCγ, che regolano la sopravvivenza neuronale, la differenziazione e la guida assonale, e contribuisce anche alla funzione dei neuroni sensoriali periferici. La segnalazione di GFRA3 è strettamente associata al controllo neurotrofico della sensibilizzazione dei nocicettori e dell’elaborazione del dolore infiammatorio; inoltre, un’alterata espressione è stata studiata in contesti di lesione nervosa, meccanismi del dolore neuropatico e interazioni tumore–nervo. In quanto co-recettore di superficie cellulare, GFRα-3 rappresenta un nodo accessibile per analizzare le dinamiche specifiche del ligando nella via di RET e il crosstalk neuro-immune.
GFRα-3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GFRA3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GFRA3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GFRA3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GFRA3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.